細(xì)胞收縮研究的小伙伴有福了，艾美捷代理的Cell Biolabs品牌提供兩種不同的3D膠原細(xì)胞培養(yǎng)模型，幫助研究人員更加方便地對(duì)細(xì)胞的收縮能力進(jìn)行體外分析，即兩步法附著模型（two-step attached model）和漂浮基質(zhì)收縮模型（floating matrix contraction model）。

備注：上述產(chǎn)品僅限用于科研學(xué)術(shù)研究用途，不得用于醫(yī)療與診斷。

常見問題解析：

Q1：細(xì)胞收縮試劑盒是否只適用于成纖維細(xì)胞樣本？

A1：Cell Biolabs提供的兩種不同的細(xì)胞收縮分析試劑盒都是基于膠原凝膠的細(xì)胞收縮試驗(yàn)，它不是細(xì)胞類型特異性試驗(yàn)。像成纖維細(xì)胞一樣，適用于其他具有收縮能力的細(xì)胞，例如周細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和小梁網(wǎng)細(xì)胞等。

Q2：CBA-201中沒有提供培養(yǎng)板，需要準(zhǔn)備多大尺寸的培養(yǎng)板？

A2：CBA-201需要客戶自備24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，廠家實(shí)驗(yàn)室使用的24孔板頂部孔直徑為16.26毫米，孔底部直徑為15.62毫米，也可以使用其他尺寸的培養(yǎng)板，但是需要調(diào)整實(shí)驗(yàn)條件。（備注：CBA-5020&CBA-5021試劑盒中提供了抗粘附涂層的專用細(xì)胞收縮培養(yǎng)板）

Q3: 膠原蛋白聚合后需要加入液體培養(yǎng)基（CBA-201 step 4; CBA-5020 step 5），是加入試劑盒中提供的DMEM培養(yǎng)基，還是其他培養(yǎng)基？

A4：如果客戶的細(xì)胞不適用DMEM培養(yǎng)，他們可以使用特定于自身細(xì)胞樣本的培養(yǎng)基。

Q4: 膠原蛋白聚合失敗是什么原因？

A4：pH是膠原蛋白聚合的關(guān)鍵因素：細(xì)胞收縮試劑盒中提供的膠原蛋白溶液是呈酸性的，在實(shí)驗(yàn)前必須中和掉。當(dāng)5X DMEM添加到膠原蛋白溶液中時(shí)，它會(huì)變成黃色，因?yàn)樗匀皇撬嵝缘模且坏┨砑恿酥泻腿芤海琾H應(yīng)該是中性的，它應(yīng)該變成粉紅色。膠原蛋白只會(huì)在中性pH值下形成凝膠，因此在配制Collagen Gel Working Solution時(shí)使用校準(zhǔn)的移液器非常重要。如果混合液仍然不是中性，可以考慮慢慢加入更多的中和溶液，直到溶液呈中性。這應(yīng)該以 0.5-1.0?l 的增量緩慢進(jìn)行，因?yàn)槿绻砑犹啵琾H會(huì)變成堿性，但很難根據(jù)顏色來判斷。客戶可以通過測(cè)pH值來確認(rèn)是否是中性的。

如果經(jīng)判斷pH沒有問題，那么建議客戶嘗試在Eppendorf管中進(jìn)行小規(guī)模配制Collagen Gel Working Solution，看看是否能看到聚合反應(yīng)：

Q5：釋放膠原凝膠前是否需要徹底清除孔中的培養(yǎng)基？(cat#CBA-201)

A5：釋放凝膠時(shí)無需去除培養(yǎng)基。 （備注：請(qǐng)注意，釋放凝膠時(shí)，小心地將無菌刮刀插入孔壁和凝膠之間，然后沿著壁緩慢循環(huán)移動(dòng)以完全釋放整個(gè)凝膠。 輕輕搖動(dòng)板，凝膠也應(yīng)從孔底部釋放。）

Q6：細(xì)胞培養(yǎng)兩天后，需要在膠原基質(zhì)釋放前加入收縮介質(zhì)，如BDM。但是說明書中沒有顯示加入BDM后需要培養(yǎng)多長(zhǎng)時(shí)間？（cat#CBA-201）

A6：是否加收縮介質(zhì)以及加入的收縮介質(zhì)培養(yǎng)多長(zhǎng)時(shí)間都是可選的，根據(jù)客戶的需求客戶也可以研究不同培養(yǎng)時(shí)間條件下的細(xì)胞收縮情況。（備注：客戶應(yīng)在釋放凝膠之前添加收縮介質(zhì)。 例如，如果他們想處理細(xì)胞2小時(shí)，需要在釋放凝膠之前加收縮介質(zhì)培養(yǎng)細(xì)胞2天。 但是需要注意的是，對(duì)于像2天這樣的長(zhǎng)時(shí)間孵育，客戶應(yīng)該對(duì)收縮介質(zhì)在37°C下穩(wěn)定多長(zhǎng)時(shí)間有所了解。 如果收縮介質(zhì)在2天內(nèi)不穩(wěn)定，會(huì)隨著時(shí)間的推移而降解，則需要隨時(shí)更換培養(yǎng)基。）